摘要:
本发明涉及一种化学发光免疫测定方法，特别涉及一种采用吖啶酯标记抗原或抗体分析方法以及用该方法制备一种免疫测定试剂盒，吖啶酯标记物在化学结构上有产生发光的特殊基团，在发光免疫分析过程中直接参与发光反应，通常这类物质没有本底发光，在反应中能用于检测低浓度或微量浓度的样品，是一类发光效率很高的发光剂，吖啶酯I、II分子和吖啶酰胺III均可与抗体(或抗原)结合，生成具有化学发光活性强、免疫反应特异性高的标记抗体。
权利要求书:
1. 一种采用吖啶酯标记抗原或抗体分析方法，其特征在于，将吖啶酯与抗体或抗原结合，生成标记抗体。
2. 根据权利要求1所述的方析方法，其特征在于，吖啶酯标记在抗原或抗体的氨基上，抗体上与抗原反应的可变区，主要由有几个氨基组成，这几个氨基决定了免疫反应的特异性和亲和性。
3. 根据权利要求1所述的方析方法，其特征在于，其中还包括一种包被技术，利用聚苯乙烯包被，吖啶酯标记抗原或抗体的技术组成中，将吖啶酯标记在抗体的固定区上，使其在聚苯乙烯固相的包被技术中，其标记抗体既保持应有的特性，又不易失活。
4. 根据权利要求1所述的方析方法，其特征在于，还包括一种反应放大系统，其特征在于，采用生物素-亲和素的反应建立放大系统。
5. 根据权利要求4所述的方析方法，其特征在于，所述的反应放大系统，其特征在于，用生物素标记包被抗体，与固相抗原结合后标记物混合后，再加入亲和素-结合物聚苯乙烯固相。
6. 根据权利要求4所述的方析方法，其特征在于，所述的反应放大系统，其特征在于，采用链霉亲和素-生物素的反应方法系统。
7. 根据权利要求4所述的方析方法，其特征在于，所述的反应放大系统，以磁性微球或聚苯乙烯固相作为载体，在表面上最大量的包被上链霉亲和素，(1)与标记了生物素的抗原或抗体反应形成链霉亲和素一生物素包被抗体，(2)再与标记物一起形成高亲合力的牢固结合及多级放大效应，可达到检测浓度小于1Pmol/L的超微量物质。
8. 根据权利要求4所述的方析方法，其特征在于，所述的反应放大系统，生物素-亲和素反应放大系统应用于磁颗粒的包被中，用所形成的亲和素-生物素-酶复合物抗与磁颗粒结合，追踪生物素酶或吖啶酯标记的抗原或抗体，通过酶催化底物显色，可检出相应的抗体或抗原。
9. 一种利用权利要求1的方法制备的甲状腺素(T4)免疫诊断试剂盒，其特征在于，该试剂盒采用吖啶酯标记工艺对T4抗原进行标记并纯化，在磁颗粒的包被技术中，用辣根过氧化物酶标记，借助抗体与磁颗粒的结合，追踪辣根过氧化物酶标记的抗原或抗体，可检出相应的抗体或抗原，用包被有抗荧光素抗体或抗羊二抗的磁性微粒子，将羊抗T4多抗标记荧光素后预先与包被有抗荧光素抗体的磁性微粒子反应或直接将T4羊抗与包被有抗羊二抗的磁性微粒子反应，最终实现间接将羊抗T4多抗包被在磁性微粒子上，并通过洗涤分离后保存，利用生物素-亲和素系统，将羊抗T4多抗标记生物素，借助所形成的亲和素-生物素-抗体与磁颗粒结合，与辣根过氧化物酶标记的抗原或抗体反应，检出相应的抗体或抗原，将抗体包被在磁颗粒上，采用闪光型化学发光物质吖啶酯作为标记物，标记抗体(抗原)，与样本中的抗原(抗体)三者结合，直接发光进行定性和定量分析。
10. 根据权利要求9的甲状腺素(T4)免疫诊断试剂盒，其特征在于，包括以下内容吖啶酯标记物的制备：吖啶酯标记物在化学结构上有产生发光的特殊基团，在发光免疫分析过程中直接参与发光反应，通常这类物质没有本底发光，在反应中能用于检测低浓度或微量浓度的样品，是一类发光效率很高的发光剂，吖啶酯I、II分子和吖啶酰胺III均可与抗体(或抗原)结合，生成具有化学发光活性强、免疫反应特异性高的标记抗体，吖啶酯标记在抗原(抗体)的氨基上，抗体上与抗原反应的可变区有几个氨基，这几个氨基决定了免疫反应的特异性和亲和性，所以要想既能比较高效率的标记上吖啶酯又不能损伤抗体活性，一个很好的途径就是将吖啶酯标记在抗体的固定区上，使其既保持应有的特性，又不易失活，将抗体包被在磁颗粒上：微粒子是由高分子单体聚合成的微球或颗粒，直径多为微米或毫米级，微粒子带有能与蛋白质结合的功能团(如-NH2、-COOH、-OH、-CHO等)，易于抗体(抗原)形成化学偶联，且结合容量大，此外，在反应时，微粒子可以均匀的分散到整个反应溶液中，使反应面积增加，反应速度加快，磁性颗粒在液相中可使反应物(抗体)迅速有效的结合到其表面，在这里也可应用亲和素-生物素放大系统，亲和素-生物素发大系统的应用：生物素通过噻吩环戊酸侧链上的羧基与多种大分子偶连活化后，可用于标记各种蛋白质(包括抗原、抗体、酶等)，形成生物素化蛋白质衍生物，一个蛋白质分子可以与多个生物素分子结合，从而具有较高的比活性，生物素化大分子的多价性是生物素-亲和素系统多级放大作用的物质基础。
专利号:
CN200810127046 |
