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吖啶酯或吖啶磺酰胺盐用于抗原或抗体的标记

1.酶标记

在蛋白质芯片中常用的标记酶有辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glueose 6-phosphate-dehydrogenase,G6PD)、β-D-半乳糖苷酶(fi_galactosidase,β-Gal)等。其中HRP由于比活性高、价廉易得、获得方便等优点,在蛋白质芯片检测酶标记中最为常用。酶标记抗原(抗体)的方法主要有两种,一种是直接法,另一种是交联法。直接法是用过碘酸钠使酶分子表面的多糖羟基氧化成醛基,醛基可以和抗体(抗原)中的游离氨基反应形成Schiff碱,然后用硼酸化钠终止反应,从而实现酶与蛋白质分子(抗原或者抗体)的结合。这种方法仅适用于含糖基酶标记物的制备,其他酶不适用。交联法是通过双功能交联剂将待标记的酶与蛋白质分子(抗原或者抗体)连接在一起。根据交联剂上反应基团类型是否相同,可将交联剂分为两种:一类是同源双功能交联剂,如戊二醛、苯二马来酰胺,另一类是异源双功能交联剂,如羟琥珀酰亚胺酯。目前还有很多商品化的试剂可以购买得到。

 

2.荧光物标记

荧光免疫分析中常用的荧光物质有异硫氰酸荧光素、丹磺酰氯、若丹明B-异硫氰酯、Cy3、Cy5等。普通的荧光标记有许多不足之处,如荧光基团的荧光寿命较短,检测时本底荧光信号的干扰大,检测时不能将发射光中散射的激发光有效地去掉,而时间分辨荧光免疫分析(time-resolved fluoro-immunoassay,TRFI-A)技术以镧系元素为标记物,利用波长和时间两种单位分辨,有效地克服了普通荧光标记的诸多不足,大大提高了检测分析的灵敏度。目前,在蛋白质芯片的检测中常用的荧光标记物是Cy3及Cy5两种物质。而且这两种物质在一般的试剂公司都能购买。

 

3.化学发光物质标记

常用的化学发光物有吖啶酯或吖啶磺酰胺盐,吖啶酯或吖啶磺酰胺盐可共价结合于蛋白质分子(抗原或者抗体)上,标记好的蛋白质分子(抗原或者抗体)与对应物结合后,用启动发光试剂(NaOH+H2O2)与吖啶酯或吖啶磺酰胺盐作用从而产生可检测的光信号。

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